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세포주배양

세포배양법

동결세포주 배양법
  1. 앰플을 드라이아이스 용기에서 꺼낸후 37-40℃의 수조에 넣는다.
  2. 40-60초 동안 신속하게 녹인다.
  3. 얼음이 녹자마자 수조에서 앰플을 꺼낸 후 상온의 70%알콜속에 넣어 소독한다. 이 순간부터무균작업대에서 작업을 실시한다.
  4. 다시 알콜솜으로 앰플을 재소독한다. 알콜솜이나 여러겹의 소독된 타올 사이에 앰플을 넣은 후 황금색의 띠가 둘러진 앰플의 목부위를 부러뜨린다.
  5. DMSO(dimethylsulfoxide)를 제거하기 위하여 15ml 튜브에 키우고자하는 배양액(10% FBS가 첨가된 RPMI1640 혹은 DMEM)을 10ml 정도 넣은 다음 앰플속의 세포부유액(1-1.5ml)을 옮긴다.
  6. 1,000 rpm(200-400g)에서 3분간 원심분리한다.
  7. 상층액을 제거한 후, 약 5ml의 배지에 cell pellet을 부유시킨다.
  8. 배양용 플라스크(T25cm2)에 세포부유액(cell suspension)을 옮긴다.
  9. 플라스크의 한면에 앰플에 인쇄된 세포이름과 배양날짜 배지 등을 기입한다.
  10. 5%의 CO2와 95%의 공기가 공급되는 37℃의 배양기에서 배양한다.
  11. 배지는 세포가 자라는 양상을 관찰하면서 교체한다. 즉, 바닥면적의 약 80%이상을 세포들이 차지하며 배지의 색깔이 변하면 배지의 약 80%정도를 교체해 준다.
  12. 세포가 충분히 자랐을 경우, 필요에 따라 T75cm2플라스크에 옮긴다.
단층세포 배양법

배양용기는 배지로 완전히 채워진 상태

  1. 플라스크의 입구주변을 소독한 후 5ml정도의 배지만 남겨놓은채 모든 배지를 제거한 후 37℃ 배양기에서 배양한다. 때로는 취급도중에 세포들이 떨어져 배지속에 부유하여 있을 수 있으므로, 플라스크 내의 모든 배지를 원심분리용관에 옮긴 후 1,000 rpm에서 3분정도 원심분리하여 cell을 모은 후, 5ml정도의 배지만 남긴 후 나머지 배지는 제거한다.
  2. 세포를 부유시킨 후 배양용 플라스크(T25cm2)에 옮긴다.
  3. 5%의 CO2와 95%의 공기가 공급되는 37℃의 배양기에서 배양한다.
  4. 배지는 1주일에 두번정도 80%를 교체한다.
부유세포 배양법

세포는 15ml 원심분리용관에 배지로 완전히 채워진 상태

  1. 1,000 rpm에서 3분정도 원심분리하여 cell을 모은 후, 5ml정도의 배지만 남긴 후 나머지 배지는 제거한다. 세포를 부유시킨 후 배양용 플라스크(T25cm2)에 옮긴다.
  2. 5%의 CO2와 95%의 공기가 공급되는 37℃의 배양기에서 배양한다.
  3. 배지는 1주일에 두번정도 80%를 교체한다.

배지조성표

Dulbecco´s Modified Eagle Medium(DMEM)
DMEM/F12(1:1) Medium
Iscove´s Modified Dulbecco´s Medium(IMDM)
Leibovitz´s L-15 Medium
McCoys 5A Medium
MEMαMedium
Minimum Essential Medium(MEM)
RPMI 1640 Medium
□ 한국세포주은행 배지 정리
ACL-4 폐선암 세포주의 수립을 위해 개발된 규정배지로 자궁암, 후두암, 대장암 세포주 배양시 사용
AR RPMI 1640배지에 ACL-4 배지 합성 시 첨가하는 인자들을 첨가한 배지
AR5 AR배지에 56℃ 30분 동안 가열하여 비활성화시킨 5% 우태혈청을 첨가한 배지로 대장암, 직장암 세포주 배양시 사용
AR5T AR5에 10 ng/ml TSH를 첨가한 배지로 갑상선암 세포주 배양에 사용
R0 RPMI 1640배지
R1 R0배지에 56℃ 30분간 가열하여 비활성화시킨 1% 우태혈청을 첨가한 배지
R5 R0배지에 56℃ 30분간 가열하여 비활성화시킨 5% 우태혈청을 첨가한 배지
R10 R0배지에 56℃ 30분간 가열하여 비활성화시킨 10% 우태혈청을 첨가한 배지로, 위암, 직장암, 난소암, 골육종 세포주 배양시 사용
R-TIP RPMI 1640배지에 transferrin, 인슐린, sodium pyruvate만을 첨가한 배지로 자궁경부암 세포주 배양시 사용
DF DMEM과 Ham's F12를 1 : 1 혼합한 배지로서 일차로 모든 세포를 잘 자라게 해주는 장점이 있으나 동시에 섬유아세포의 성장도 강력하여 세포주 수립에 용이치 못하다.
DF10 DF + 10%우태혈청
ADF5 AR5의 성장인자를 DF에 혼합한 배지. 망막아세포종, 신장암 세포주 배양시 사용
ADF5E ADF5 + 17-β-estradiol 10 pM, 난소암, 유방암, 자궁암 세포주 배양시 사용.

ACL4배지

  • Amounts : 500ml, when 5% serum added
  • Storage : 2 to 8℃
  • Requirement : PROTECT FROM LIGHT
  • Components :
    • Basal medium : RPMI 1640 (HEPES,NaHCO3)
    • Insulin : 10ml(20ug/ml)
    • Transferrin : 0.5ml(10ug/ml)
    • Sodium Selenite : 2.5ml(25nM)
    • Hydrocortisone : 2.5ml(50nM)
    • EGF : 2.5ml(1ng/ml)
    • Eth/PE : 0.5ml(10uM)
    • T3 : 0.5ml(0.1nM)
    • BSA : 5ml(0.2%)
  • To make AR5 Medium, add 25ml of FBS.
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